Invigentech胎牛血清,培养 Raw264.7细胞经验分享1、培养细胞名称：RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) 2、细胞形态：圆形3、生长培养基品牌： Invigentech（英克）4. 生长培养基：胎牛血清-(A6903FBS-500);青链霉素混合液（100X）（双抗）-(IN0007-100);DMEM高糖(IN0009);5、冻存条件：冻存液：55% 基础培养基+4
我们使用转染试剂（＃AD600150，ZETA life，USA）将ABC A9的特定siRNA转染到细胞中，根据制造商的规程使其表达沉默.简而言之，将BMDM巨噬细胞放在6孔板中，密度为2.5×105细胞。 当细胞密度为70％时，进行转染。 在室温下混合10 µL siRNA（100 pmol/mL）和10 ul转染试剂并静止15分钟，然后加入含有1ml正常DMEM的6孔板中。24小时后，除去培养基并添加新鲜的DMEM培养基以继续培养24小时后收细胞。
当NIH/3T3细胞生长密度达到60%，在不含FBS培养基的六孔板中进行转染。对于细胞转染使用5μM pGPU6/GFP/Neo-shTRIM11,siALKBH5,miR-21a-5p mimic,miR-590–5p mimic, miR-361–3p mimic, miR-202–3p mimic和相应对照，使用 Advanced DNA/RNA转染试剂(#AD600025 Zeta life, USA) 对细胞转染；在转染24小时后分别对TRIM11或ALKBH5通过蛋白质印迹或qPCR检测敲低效率。
荧光素标记的siRNA每个基因设计有三个siRNA，使用美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂（Zeta Life，Menlo Park，CA，United States）用siRNA转染犬/狗脂肪间充质干细胞(ADMSCs),RT-qPCR用于检测siRNA 的沉默效率，并选择沉默效率最高的一种，在整个转染过程中，该基因每7天转染一次以保持沉默。
