Biozellen™胃癌类器官基础培养基

货号:B-D-0005A-100、B-D-0005A-500

规格:100ML、500ML

产品介绍

Biozellen™ 胃癌类器官基础培养基可应用于人胃癌来源类器官的常规培养传代，能够保持其传代后的生长活力，类器官培养过程中，不用添加任何其他蛋白因子。

操作步骤：

1、 原代

（1）将胃癌组织放入含有特殊组织保存液的组织取样瓶中放入冰盒4℃从医院/实验室取回，拍照并登记信息。

（2）取样瓶消毒，组织放入培养皿，胃癌类器官培养缓冲液清洗三次后于培养皿中剪碎，大约1mm³的组织块。

（3）癌组织用胃癌类器官原代消化液消化，37℃震荡消化10-20 min，（消化过程中随时观察消化情况）加入三倍体积胃癌类器官培养缓冲液终止消化。

（4）使用100μm孔径的筛网进行过滤，取少量滤液在镜下进行观察，可以看到明显的组织块，将滤液收集后于300g富集离心5min后移去上清，重新重悬离心。

（5）去除上清，使用适量基质胶进行重悬(24孔板为例，每孔30ul）之后进行铺板（4℃下操作）拍照。

（6）将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶，添加胃癌类器官培养基（恢复室温）进行培养。

2、 类器官传代培养

（1）移液器吸去培养基，添加4℃类器官缓冲液放置3min。

（2）移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置5min。

（3）离心5min弃去液体，添加适量胃癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体或（添加适量类器官传代消化液作用2min终止，离心5min弃去混合液）。

（4）类器官收集后，添加适量类器官冻存液，按500个/ml密度冻存（或进行步骤5）。

（5）类器官收集后，基质胶重悬，每孔30μl基质胶铺在24控板中，放置培养箱中10-15min添加500μl胃癌类器官培养基。

3、 类器官复苏

（1）取10ml胃癌类器官培养缓冲液于15ml离心管中

（2）从液氮罐中取出冻存的肿瘤类器官细胞，快速置于 37℃水浴锅中融解。

（2）水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2 分钟内完全融解。

（3）将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml 无菌离心管，使用移液管轻轻吹打3次，300g 离心 3分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量胃癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。

（4）基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24控板中，放置培养箱中10min添加500μl胃癌类器官培养基。

仅供研究使用

Biozellen™ 胃癌类器官基础培养基可应用于人胃癌来源类器官的常规培养传代，能够保持其传代后的生长活力，类器官培养过程中，不用添加任何其他蛋白因子。